Изобретение ученых ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России отмечено в Роспатенте

За каждым успехом в диагностике или лечении онкогематологических заболеваний стоят сотни научных исследований и многолетняя кропотливая работа ученых и врачей.

Праймеры, меченые флуоресцентным зондом — основной компонент тест-системы

Неоценимый вклад в общее дело вносят и представители ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России. Разработанная командой ученых (К. А. Сычевская, С. К. Кравченко, А. Б. Судариков) тест-система для определения дефекта гена SESN1 методом мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР), не имеет аналогов ни в России, ни в мире. Изобретение позволяет исследовать новые факторы неблагоприятного прогноза у больных фолликулярной лимфомой.

— Мы искали возможности улучшения как диагностики, так и терапии фолликулярной лимфомы, как частного варианта В-клеточных неходжкинских лимфом. Фолликулярная лимфома — достаточно гетерогенная группа заболеваний, и именно в ней до сих пор остается существенный дефицит понимания патогенеза развития рефрактеных к терапии форм и возможностей их лечения,— рассказала врач-гематолог отделения гематологии и химиотерапии лимфопролиферативных заболеваний К. А. Сычевская.— До сих пор встречается много пациентов, которые резистенты ко всему арсеналу имеющихся средств, в том числе и новым таргетным препаратам, и эти больные, к сожалению, погибают в среднем в течении двух лет от начала заболевания.

Именно судьба этих пациентов подтолкнула ученых к изучению патогенетических путей возникновения и прогрессирования опухоли. Система направлена на диагностику нарушений гена SESN1, известного также как Sestrin-1 по названию кодируемого им одноименного белка. Сегодня есть данные в пользу того, что именно дефицит функциональной активности этого белка, связанный с соматическими мутациями опухолевых клеток, предопределяет развитие опухоли.

— Отсутствие этого белка, сопряженное с дефектом гена, приводит к тому, что опухолевые клетки не отвечают на химиотерапию,— отметила Ксения Андреевна.— Если все нормальные клетки в ответ на воздействие препарата, который индуцирует апоптоз, погибают, то клетки с дефицитом этого белка остаются в живых, при этом уже с новым набором вторичных мутаций, которые были индуцированы самим воздействием химиопрепарата.

Ученые акцентировали внимание на микросателлитных локусах — коротких участках ДНК, содержащих тандемные повторы. Исследование проводилось in vitro — в пробирке. Сложность разработки диагностической тест-системы состояла в поиске неизвестных ранее микросателлитных повторов гена SESN1, подборе специфичных праймеров и определении их оптимальных сочетаний, которые бы позволили проводить мультиплексную ПЦР с расходом минимума биологического материала пациента. Пилотная «обкатка» системы потребовала проведения нескольких тысяч реакций, и в итоге цель была достигнута. Работоспособность системы апробирована в когорте доноров и доказана в пилотной когорте пациентов в дебюте заболевания. Результаты исследования здоровых и опухолевых клеток представлены в виде электрофореграмм, полученных методом капиллярного электрофореза.

Результат исследования панели микросателлитных локусов гена SESN1 у здорового донора. На графике электрофореграммы по оси Х отмечена длина ПЦР-продукта, п. н. По оси Y отмечена интенсивность флуоресценции меченого ПЦР-продукта, е. ф.

Результат исследования панели микросателлитных локусов у пациента. На графике электрофореграммы по оси Х отмечена длина ПЦР-продукта, п. н. По оси Y отмечена интенсивность флуоресценции меченого ПЦР-продукта, е. ф. Стрелочками указаны локусы утраты одного из аллелей в опухолевом образце, соответствующие делеции гена SESN1

— На основании отсутствия пиков одного из аллелей или уменьшения интенсивности его флуоресценции по отношению к пику второго аллеля соответствующего микросателлитного локуса в опухолевой ткани при сравнении с контрольным образцом можно определить наличие делеции гена SESN1. Это позволяет выявить группу пациентов с неблагоприятным течением фолликулярной лимфомы,— отметила Ксения Андреевна.

Система нацелена не только на диагностику, но и на выбор специфической терапии с учетом определения прогноза заболевания. Клиническое значение изобретения предстоит выяснить при расширении выборки больных в дальнейших исследованиях.

Праймеры, меченые флуоресцентным зондом — основной компонент тест-системы

Врач-гематолог, аспирант К. А. Сычевская в лаборатории молекулярной гематологии

Врач-гематолог, аспирант К. А. Сычевская с заведующим лабораторией молекулярной гематологии д. б. н. А. Б. Судариковым

Результат исследования панели микросателлитных локусов гена SESN1 у здорового донора. На графике электрофореграммы по оси Х отмечена длина ПЦР-продукта, п. н. По оси Y отмечена интенсивность флуоресценции меченого ПЦР-продукта, е. ф.

Результат исследования панели микросателлитных локусов у пациента. На графике электрофореграммы по оси Х отмечена длина ПЦР-продукта, п. н. По оси Y отмечена интенсивность флуоресценции меченого ПЦР-продукта, е. ф. Стрелочками указаны локусы утраты одного

Врач-гематолог К. А. Сычевская с заведующим отделением гематологии и химиотерапии лимфопролиферативных заболеваний к. м. н. доцентом С. К. Кравченко